Dynactin p62 Plasmide Double Nickase (m): sc-426674-NIC

Il gene murino Dctn4 codifica la dynactina p62, una subunità del complesso della dynactina che supporta il trasporto citoplasmatico mediato dalla dineina lungo i microtubuli. La dynactina p62 contribuisce al legame con il carico e alla motilità processiva degli assemblaggi dineina–dynactina, influenzando il posizionamento di endosomi e lisosomi, il traffico vescicolare e la gestione dei carichi associati all’autofagia. Attraverso queste funzioni, Dctn4 incide sull’omeostasi dei neuroni e delle cellule immunitarie, in cui il trasporto a lunga distanza e la distribuzione degli organelli sono cruciali. L’alterazione di componenti della via dineina–dynactina è ampiamente associata a fenotipi neurodegenerativi, a una proteostasi compromessa e a segnali infiammatori, rendendo Dctn4 un nodo utile per studi meccanicistici dei difetti di trasporto basati sui microtubuli.

Dynactin p62 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Dctn4 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Dctn4. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Dctn4. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Dctn4 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.