Dynactin 1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-402369

Descripción general

DCTN1 codifica la dinactina 1, la principal subunidad p150Glued del complejo dinactina, que acopla la dineína citoplasmática a la carga y a los microtúbulos para sostener un transporte procesivo dirigido hacia el extremo menos. La dinactina 1 contribuye al tráfico de vesículas y orgánulos, al posicionamiento endosoma–lisosoma, a la organización del aparato de Golgi, a la función del huso mitótico y al transporte axonal neuronal mediante la regulación del motor dineína–dinactina. Al coordinar el transporte y la dinámica del citoesqueleto, DCTN1 influye en vías subyacentes a la proteostasis, el flujo autofágico y el manejo de los gránulos de estrés en células de larga vida, como las neuronas. La alteración genética o la disfunción de DCTN1 se ha vinculado a fenotipos neurodegenerativos, lo que lo convierte en un objetivo relevante para estudios mecanísticos de defectos de transporte impulsado por motores y de la vulnerabilidad neuronal.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Dynactin 1 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen DCTN1 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del DCTN1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de DCTN1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Dynactin 1.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en DCTN1 para la investigación de la señalización de Dynactin 1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de DCTN1 críticos para la función de Dynactin 1
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de DCTN1 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Dynactin 1 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido Dynactin 1 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus DCTN1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Dynactin 1 (h) y el plásmido HDR Dynactin 1 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología DCTN1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana DCTN1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.