Dynactin 1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-402369

Visão geral

DCTN1 codifica a dinactina 1, a principal subunidade p150Glued do complexo dinactina, que acopla a dineína citoplasmática à carga e aos microtúbulos para sustentar o transporte processivo direcionado para a extremidade menos. A dinactina 1 contribui para o tráfego de vesículas e organelos, o posicionamento endossomo–lisossomo, a organização do Golgi, a função do fuso mitótico e o transporte axonal neuronal por meio da regulação do motor dineína–dinactina. Ao coordenar o transporte e a dinâmica do citoesqueleto, DCTN1 influencia vias subjacentes à proteostase, ao fluxo autofágico e ao processamento de grânulos de stress em células de longa vida, como os neurónios. A disrupção genética ou a disfunção de DCTN1 tem sido associada a fenótipos neurodegenerativos, tornando-o um alvo relevante para estudos mecanísticos de defeitos no transporte impulsionado por motores e da vulnerabilidade neuronal.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO Dynactin 1 (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene DCTN1 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do DCTN1, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do DCTN1 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína Dynactin 1.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de DCTN1 para a investigação da sinalização de Dynactin 1, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) DCTN1 críticos para a função Dynactin 1
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos DCTN1 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo Dynactin 1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo Dynactin 1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus DCTN1. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo Dynactin 1 Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR Dynactin 1 (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia DCTN1 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo DCTN1 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.