Dvl-3/Dishevelled 3/DVL3 Double Nickaseプラスミド (h): sc-401041-NIC

DVL3は、FrizzledおよびLRP5/6の下流で受容体近傍の反応を統合し、Wntシグナルを伝達する細胞質スキャフォールドタンパク質Dishevelled 3（Dvl-3）をコードします。Dvl-3は、カノニカルなβ-カテニン/TCF依存性の転写制御に加え、非カノニカルな平面細胞極性（PCP）経路やWnt/Ca²⁺経路にも関与し、細胞極性、細胞骨格の再編成、遊走、発生パターニングに影響を与えます。これらのシグナル出力を介してDVL3は増殖および分化プログラムの制御に寄与し、Wntシグナル伝達が再配線されるような状況でしばしば研究対象となっています。DVL3依存性シグナルの異常は、がん原性経路の活性化、浸潤表現型の変化、ならびにWnt経路制御の破綻に関連するより広範な発生・神経疾患メカニズムと関連づけられています。

Dvl-3/Dishevelled 3/DVL3 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における DVL3 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、DVL3内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、DVL3の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、DVL3が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。