DUSP27 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404063-ACT

DUPD1 codifica o membro da família de fosfatases de dupla especificidade DUSP27, uma proteína implicada na regulação de sinalização dependente de fosforilação, ao modular resíduos de serina/treonina e de tirosina em proteínas-alvo. A atividade associada à DUSP27 está ligada ao controlo de vias conduzidas por quinases que coordenam a diferenciação celular, a organização do citoesqueleto e programas de sinalização responsivos ao stress. Em tecidos humanos, a expressão de DUSP27 tem sido analisada no contexto do desenvolvimento e da remodelação muscular, em que alterações no equilíbrio fosfatase/quinase podem influenciar a função contrátil e transições de estado celular. A desregulação da sinalização da família DUSP é amplamente relevante para doenças com atividade aberrante de vias relacionadas com MAPK e homeostase de fosforilação alterada, sustentando o uso de modelos de perturbação de DUSP27 para estudos mecanísticos.

DUSP27 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de DUPD1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

DUSP27 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus DUPD1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição DUPD1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de DUSP27. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus DUPD1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de DUSP27 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via DUSP27 em células tumorais com expressão de DUPD1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.