DUSP27 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-404063-ACT

DUPD1は、二重特異性ホスファターゼ（dual specificity phosphatase）ファミリーの一員であるDUSP27をコードしており、標的タンパク質上のセリン／スレオニン残基およびチロシン残基のリン酸化状態を調節することで、リン酸化依存的なシグナル伝達の制御に関与するタンパク質とされています。DUSP27に関連する活性は、細胞分化、細胞骨格の構築、ストレス応答性のシグナル伝達プログラムを協調させるキナーゼ駆動経路の制御と結び付けられています。ヒト組織では、DUSP27の発現は筋の発生やリモデリングとの関連で検討されており、ホスファターゼ／キナーゼのバランス変化が収縮機能や細胞状態の移行に影響し得ます。DUSPファミリーのシグナル伝達の異常は、MAPK関連経路の異常活性やリン酸化恒常性の破綻を伴う疾患全般に広く関係することから、機序解明研究においてDUSP27の摂動モデルを用いる意義が支持されます。

DUSP27 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性DUPD1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

DUSP27 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における DUPD1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はDUPD1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性DUSP27の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のDUPD1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるDUSP27依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびDUPD1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるDUSP27経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。