Plásmido CRISPR de Activación (h) DSCAML1: sc-409552-ACT

DSCAML1 (molécula de adhesión celular tipo 1 similar a la del síndrome de Down) codifica un receptor de adhesión celular de la superfamilia de las inmunoglobulinas, de expresión neuronal, implicado en el crecimiento de neuritas, la guía axonal y la organización de sinapsis durante el neurodesarrollo. Mediante interacciones homofílicas y heterofílicas en la superficie celular, DSCAML1 contribuye a la señalización dependiente de contacto que moldea el ensamblaje de los circuitos neuronales y el patrón de arborización dendrítica. La desregulación de la expresión de DSCAML1 o sus variantes se ha asociado con fenotipos del neurodesarrollo y neuropsiquiátricos, lo que respalda su relevancia para estudios sobre conectividad sináptica y desarrollo cerebral. En modelos celulares humanos, DSCAML1 constituye un nodo abordable para investigar vías dependientes de la adhesión que coordinan la diferenciación neuronal y la formación de redes.

DSCAML1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de DSCAML1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

DSCAML1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus DSCAML1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional DSCAML1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de DSCAML1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo DSCAML1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de DSCAML1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía DSCAML1 en células tumorales con expresión de DSCAML1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.