DP2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404990-ACT

O gene humano PTGDR2 codifica o DP2 (CRTH2), um recetor acoplado à proteína G para a prostaglandina D2, enriquecido em populações de células imunitárias do tipo 2, incluindo eosinófilos, basófilos e linfócitos Th2. A sinalização do DP2 acopla-se principalmente a vias dependentes de Gi para regular a quimiotaxia, a mobilização de cálcio e programas de citocinas que moldam a inflamação alérgica e as respostas imunitárias das mucosas. Por meio da modulação do tráfego de leucócitos e da função efetora, a atividade do PTGDR2 é frequentemente investigada no contexto de asma, rinite alérgica, dermatite atópica e estados inflamatórios eosinofílicos. Como recetor de superfície celular que integra sinais de mediadores lipídicos, o DP2 constitui um ponto de intervenção acessível para estudar a transdução de sinal de GPCR e circuitos de migração de células imunitárias.

DP2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de PTGDR2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

DP2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus PTGDR2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição PTGDR2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de DP2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus PTGDR2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de DP2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via DP2 em células tumorais com expressão de PTGDR2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.