Doublecortin Plasmide KO CRISPR/Cas9 (r): sc-437358

Panoramica

La doublecortina (DCX) è una proteina neuronale associata ai microtubuli che si lega ai microtubuli e li stabilizza, regolando la dinamica del citoscheletro durante la neurogenesi. È altamente espressa nei neuroblasti migranti e nei neuroni immaturi, dove sostiene la crescita dei neuriti, la polarizzazione neuronale e la stratificazione corticale attraverso il controllo della polimerizzazione dei microtubuli e del trasporto intracellulare. La DCX interagisce con vie che regolano il coordinamento actina–microtubuli, il posizionamento del centrosoma e la guida assonale, collegando il rimodellamento del citoscheletro alla programmazione dello sviluppo. L’alterazione della funzione di DCX è associata ad anomalie del neurosviluppo e a una connettività neuronale modificata, rendendola un marcatore ampiamente utilizzato e un nodo meccanicistico negli studi sulla migrazione neuronale e sullo sviluppo cerebrale.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Doublecortin (r) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene in linee cellulari rat. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Doublecortin.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di per lo studio della segnalazione di Doublecortin, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni critici per la funzione di Doublecortin
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Doublecortin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (r) e dal Doublecortin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (r2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus . Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Doublecortin Plasmide HDR (r) e il plasmide HDR Doublecortin (r2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.