DOT1L1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403286-ACT

ヒトDOT1L（DOT1L1）は、ヒストンリジンメチルトランスフェラーゼをコードしており、H3K79のモノメチル化、ジメチル化、トリメチル化を触媒します。H3K79メチル化は、遺伝子本体領域における活発な転写と関連するエピジェネティックな標識です。DOT1L依存的なクロマチン制御は、RNAポリメラーゼIIの伸長、エンハンサー—プロモーター間の相互作用、およびDNA損傷シグナル伝達と細胞周期進行の協調を支えます。系統特異的な転写プログラムの制御を介して、DOT1Lは造血分化ならびにより広範な発生関連遺伝子ネットワークに影響を与えます。DOT1L活性の異常やH3K79メチル化状態の変化は、白血病をはじめとするがんでみられる転写ネットワークの破綻（ミスワイヤリング）と関連し、また状況依存的にゲノム安定性にも影響を及ぼすことが示されています。

DOT1L1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性DOT1Lの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

DOT1L1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における DOT1L 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はDOT1L転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性DOT1L1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のDOT1L遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるDOT1L1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびDOT1L発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるDOT1L1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。