DOCK 8 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-401727

概要

DOCK8は、RhoファミリーGTPaseを活性化するグアニンヌクレオチド交換因子（GEF）をコードしており、免疫細胞の移動、接着、ならびに免疫シナプス形成に必要なアクチン細胞骨格の再編成を協調的に制御します。DOCK8はリンパ球の生存とシグナル伝達を支え、走化性、抗原刺激による活性化、細胞傷害性エフェクター機能などの過程に影響を与えます。DOCK8の機能破綻は、抗ウイルス応答の低下、アレルギー性炎症、悪性腫瘍への感受性増大を特徴とする原発性免疫不全の表現型と関連しており、免疫恒常性における中心的役割を示しています。機序解析の研究では、DOCK8はT細胞、B細胞、NK細胞、樹状細胞において、細胞骨格ダイナミクス、細胞極性、免疫シナプスの安定性を制御する経路の一部として頻繁に検討されています。

DOCK 8 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるDOCK8遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、DOCK8内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、DOCK8のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、DOCK 8タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、DOCK 8シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、DOCK8欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• DOCK 8の機能に不可欠なDOCK8エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、DOCK8ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• DOCK 8 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびDOCK 8 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、DOCK8遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  DOCK 8 HDRプラスミド（h）および DOCK 8 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはDOCK8ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のDOCK8標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。