DOCK 7 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404461-ACT

DOCK7 (DOCK 7) é um fator de troca de nucleotídeos de guanina atípico que ativa GTPases da família Rho, particularmente Rac1 e Cdc42, para coordenar a remodelação do citoesqueleto de actina, a polaridade celular e a migração direcional. Por meio desses nós de sinalização, o DOCK7 contribui para o crescimento de neuritos, a orientação axonal e processos relacionados à mielinização, conectando a dinâmica do citoesqueleto a vias de desenvolvimento e de tráfego intracelular. A atividade alterada de DOCK7 tem sido associada a fenótipos do neurodesenvolvimento e a programas desregulados de motilidade celular, relevantes para estudos do desenvolvimento do sistema nervoso e da biologia associada à invasão. Como plataforma de sinalização e regulador de GTPases, o DOCK7 também é usado para investigar a comunicação cruzada entre a sinalização por GTPases Rho, a dinâmica de membranas e vias dependentes de quinases que controlam morfologia e adesão.

DOCK 7 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de DOCK7 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

DOCK 7 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus DOCK7 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição DOCK7, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de DOCK 7. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus DOCK7 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de DOCK 7 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via DOCK 7 em células tumorais com expressão de DOCK7 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.