Dnmt3L Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-424871

Visão geral

Dnmt3l codifica a Dnmt3L, um cofator cataliticamente inativo que estimula as metiltransferases de DNA de novo DNMT3A e DNMT3B a estabelecer e manter padrões de metilação do DNA durante o desenvolvimento. Em camundongos, Dnmt3L é altamente relevante para a programação epigenética da linhagem germinativa, na qual sustenta a metilação de retrotransposons e de regiões de controle de imprinting, contribuindo para a estabilidade do genoma e para a regulação gênica específica da origem parental. Por meio dessas funções, Dnmt3L integra-se a vias de regulação epigenética que coordenam o estado da cromatina, o silenciamento transcricional e a reprogramação associada à meiose. A desregulação de processos de metilação associados à DNMT3L está ligada a defeitos de imprinting, à alteração da repressão de transposons e a uma instabilidade mais ampla do epigenoma, que pode influenciar fenótipos do desenvolvimento e estados epigenéticos relevantes para doenças.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO Dnmt3L (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Dnmt3l em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Dnmt3l, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Dnmt3l na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína Dnmt3L.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Dnmt3l para a investigação da sinalização de Dnmt3L, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Dnmt3l críticos para a função Dnmt3L
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Dnmt3l para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo Dnmt3L Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo Dnmt3L Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Dnmt3l. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo Dnmt3L Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR Dnmt3L (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Dnmt3l para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Dnmt3l definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.