Dnmt1 CRISPR Activationプラスミド (m): sc-420033-ACT

マウスのDnmt1はDNAメチルトランスフェラーゼ1（DNMT1）をコードしており、DNA複製時にCpGメチル化パターンを複製してエピジェネティックな細胞同一性を維持する、主要な維持型メチルトランスフェラーゼである。DNMT1はUHRF1やメチル化CpG結合タンパク質とともにクロマチン制御ネットワーク内で機能し、転写抑制、ゲノムインプリンティング、X染色体不活性化、トランスポゾンのサイレンシングに影響を与える。DNAメチル化をヒストン修飾や複製に共役したクロマチン組み立てと連動させることで、DNMT1はゲノム安定性と協調的な遺伝子発現プログラムの維持に寄与する。DNMT1の活性や発現の破綻は、がん化、発生異常、神経生物学的表現型に関与する異常なメチル化景観と関連しており、エピジェネティクスおよび疾患モデル研究における中核的なノードとなっている。

Dnmt1 CRISPR活性化プラスミド（m）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性Dnmt1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Dnmt1 CRISPR 活性化プラスミド (m) は、ヒト細胞株における Dnmt1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はDnmt1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Dnmt1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のDnmt1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるDnmt1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびDnmt1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるDnmt1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。