DNase II CRISPR Activationプラスミド (h): sc-405046-ACT

ヒトDNASE2はDNase IIをコードしており、DNase IIはリソソームに局在する酸性エンドヌクレアーゼで、アポトーシス細胞に由来するDNA、貪食により取り込まれた核、ならびにその他の細胞外または小胞由来のDNAを分解します。エンドリソソーム区画内のDNAを除去することで、DNase IIは核酸恒常性の維持に寄与し、自然免疫による核酸検知の異常な活性化およびそれに続く炎症性シグナル伝達経路の過剰な誘導を抑制します。DNASE2活性の破綻または調節異常は、DNAクリアランス不全、インターフェロン刺激遺伝子（ISG）プログラムの亢進、ならびに自己免疫や造血系ストレスに関連する炎症性表現型と関連づけられています。そのためDNase IIの機能は、アポトーシス、エフェロサイトーシス、リソソーム生物学、そして核酸駆動性の免疫制御という文脈で広く研究されています。

DNase II CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性DNASE2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

DNase II CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における DNASE2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はDNASE2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性DNase IIの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のDNASE2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるDNase II依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびDNASE2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるDNase II経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。