DnaJB6 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404227-ACT

DNAJB6 codifica a co-chaperona DnaJB6 da família Hsp40, uma proteína com domínio J que coopera com a Hsp70 para regular o dobramento, a triagem e a degradação de proteínas. A DnaJB6 está enriquecida em vias que controlam a proteostase, incluindo a supressão da agregação amiloidogénica, a modulação da autofagia e a coordenação do controlo de qualidade ubiquitina–proteassoma sob stresse celular. Por meio dessas funções, o DNAJB6 influencia a organização do citoesqueleto e programas miogénicos e está associado a distúrbios caracterizados por mau dobramento proteico e degeneração muscular, incluindo a distrofia muscular de cinturas. A atividade alterada de DNAJB6 também é estudada no contexto da adaptação ao stresse celular e da instabilidade do proteoma, relevante para pesquisas em neurodegeneração e biologia do cancro.

DnaJB6 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de DNAJB6 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

DnaJB6 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus DNAJB6 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição DNAJB6, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de DnaJB6. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus DNAJB6 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de DnaJB6 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via DnaJB6 em células tumorais com expressão de DNAJB6 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.