DNAH9 Plasmide Double Nickase (h): sc-407035-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- DNAH9 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il DNAH9 Double Nickase Plasmid (h) e il DNAH9 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira DNAH9. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
DNAH9 Plasmide Double Nickase (h) | sc-407035-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
DNAH9 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-407035-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
DNAH9 codifica la catena pesante 9 della dineina assonemale, un grande motore dei microtubuli ATP-dipendente che contribuisce al braccio esterno della dineina e genera le forze di flessione ciliare. Attraverso interazioni dineina–microtubulo regolati, DNAH9 sostiene la funzione delle ciglia motili e dei flagelli, alla base della clearance mucociliare e di altri processi di flusso di fluidi guidati dalle ciglia. Un’alterata attività di DNAH9 è stata collegata a fenotipi di ciliopatie motili, inclusi difetti di lateralità e disfunzioni del tratto respiratorio coerenti con la biologia associata alla discinesia ciliare primaria. In quanto motore ciliare ricco di parametri misurabili, DNAH9 è ampiamente studiato nei percorsi che regolano l’assemblaggio dell’assonema, la frequenza del battito ciliare e la trasduzione meccanochimica dell’energia.
DNAH9 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus DNAH9 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di DNAH9. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di DNAH9. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con DNAH9 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.