DNAH9 Double Nickaseプラスミド (h): sc-407035-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- DNAH9 Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- DNAH9ダブルニカースプラスミド（h）およびDNAH9ダブルニカースプラスミド（h2）は、DNAH9を標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
DNAH9 Double Nickaseプラスミド (h) | sc-407035-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
DNAH9 Double Nickaseプラスミド (h2) | sc-407035-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
DNAH9は、軸糸ダイニン重鎖9（axonemal dynein heavy chain 9）をコードしており、外側ダイニンアームの構成要素として働く、大型のATP依存性微小管モーターです。制御されたダイニン—微小管相互作用を介して、DNAH9は運動性線毛および鞭毛の機能を支え、粘液線毛クリアランスや、その他の線毛駆動性の液体流動プロセスの基盤となります。DNAH9活性の変化は、左右軸形成の異常や、原発性線毛運動不全症（PCD）に関連する生物学と整合する呼吸器機能障害など、運動性線毛症（motile ciliopathy）の表現型と関連づけられています。多様な読み出しが可能な線毛モーターとして、DNAH9は軸糸の組み立て、線毛拍動頻度、ならびに機械化学的エネルギー変換を制御する経路において広く研究されています。
DNAH9 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における DNAH9 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、DNAH9内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、DNAH9の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、DNAH9が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。