DNAH11 Double Nickaseプラスミド (h): sc-404143-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- DNAH11 Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- DNAH11ダブルニカースプラスミド（h）およびDNAH11ダブルニカースプラスミド（h2）は、DNAH11を標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
DNAH11 Double Nickaseプラスミド (h) | sc-404143-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
DNAH11 Double Nickaseプラスミド (h2) | sc-404143-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
DNAH11は、運動性線毛内でATP依存的な微小管の滑り運動を駆動する軸糸ダイニン重鎖をコードしており、線毛打の協調運動と効率的な粘液線毛クリアランスを支えます。外側ダイニン腕の中核構成要素として、DNAH11は軸糸構造に組み込まれ、線毛による液体の流れや発生過程における左右軸（左右体軸）パターン形成を制御します。DNAH11機能の破綻は、原発性線毛運動不全症（PCD）および左右不一致などの側性異常と強く関連しており、ダイニンモーター活性の低下が慢性気道疾患の表現型や生殖機能障害につながることを示しています。そのためDNAH11は、線毛形成、軸糸内輸送と組み立て、ならびに線毛運動の影響を受けるシグナル伝達の文脈で広く研究されています。
DNAH11 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における DNAH11 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、DNAH11内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、DNAH11の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、DNAH11が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。