DNA pol γ CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-422341

概要

Polgは、マウス細胞におけるミトコンドリアDNA（mtDNA）の主要な複製酵素であるDNAポリメラーゼγをコードしており、mtDNAの複製、修復、およびミトコンドリアゲノムの完全性維持に必須です。DNAポリメラーゼγは、ミトコンドリアヌクレオイドや塩基除去修復（BER）の構成要素と協調して働き、mtDNAのコピー数と忠実性を保つことで酸化的リン酸化を支えます。Polgの機能が損なわれるとミトコンドリア新生が障害され、mtDNA変異の蓄積が増加し、さらにレドックス恒常性の変化に関連する代謝リモデリングやストレスシグナルを誘発し得ます。Polgは、ミトコンドリアゲノムの安定性低下を原因とする神経変性、ミオパチー、加齢関連表現型など、ミトコンドリア機能障害の文脈で広く研究されています。

DNA pol γ CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるPolg遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Polg内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Polgのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、DNA pol γタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、DNA pol γシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Polg欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• DNA pol γの機能に不可欠なPolgエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Polgゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• DNA pol γ CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびDNA pol γ CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Polg遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  DNA pol γ HDRプラスミド（m）および DNA pol γ HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはPolgホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のPolg標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。