Plásmido Doble Nickase (h) DNA pol δ 4: sc-408268-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)DNA pol δ 4 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa DNA pol δ 4 (h) y el plásmido de doble nickasa DNA pol δ 4 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a POLD4. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) DNA pol δ 4 | sc-408268-NIC | 20 µg | $410.00 |
POLD4 codifica la subunidad 4 de la ADN polimerasa delta, un componente accesorio de la holoenzima ADN polimerasa δ que respalda la replicación cromosómica del ADN con alta fidelidad y la síntesis de la hebra retardada. Mediante interacciones dentro del replisoma, la polimerasa δ se coordina con la procesividad dependiente de PCNA, la maduración de los fragmentos de Okazaki y la síntesis de reparación del ADN durante la reparación por escisión de bases y la reparación de apareamientos erróneos. El correcto funcionamiento de POLD4 contribuye a la estabilidad del genoma, a la tolerancia al estrés replicativo y a una progresión precisa del ciclo celular a través de la fase S. La desregulación de las subunidades de la polimerasa δ y de las vías asociadas a la replicación se examina con frecuencia en estudios sobre mutagénesis, inestabilidad cromosómica y fenotipos de respuesta al daño del ADN asociados al cáncer.
DNA pol δ 4 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus POLD4 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de POLD4. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de POLD4. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con POLD4 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.