DMXL2 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-417505-ACT

DMXL2（Dmx-like 2）は、WDリピートを含む大型の足場（スキャフォールド）タンパク質をコードしており、小胞輸送や制御されたエキソサイトーシスに関与して、分泌およびシナプス区画における膜動態を支えます。エンドメンブレン系経路におけるタンパク質間相互作用を調整することで、DMXL2は神経細胞および内分泌細胞の機能に関連し、小胞の成熟・ドッキング・放出を連動させる過程などに関与します。DMXL2の発現や機能の変化は、神経発達に関わる表現型や生殖／内分泌系の調節異常と関連することが報告されており、ヒト細胞における分泌経路制御の研究において重要な標的となります。膜輸送の広範な調節因子として、DMXL2はシナプス生物学、ホルモン分泌、細胞恒常性のモデル研究で頻繁に解析されています。

DMXL2 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性DMXL2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

DMXL2 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における DMXL2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はDMXL2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性DMXL2の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のDMXL2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるDMXL2依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびDMXL2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるDMXL2経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。