DJ-1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-401006-ACT

Il gene umano **PARK7** codifica **DJ-1**, una proteina multifunzionale sensibile allo stato redox che contribuisce alla difesa cellulare contro lo stress ossidativo e proteotossico. DJ-1 influenza l’omeostasi mitocondriale, il tamponamento delle specie reattive dell’ossigeno e la segnalazione attivata dallo stress, ed è stata collegata alla regolazione di programmi trascrizionali e ad attività di tipo chaperon che supportano il controllo qualità delle proteine. Alterazioni della funzione di PARK7/DJ-1 sono associate alla neurodegenerazione, in particolare al morbo di Parkinson, e a fenotipi più ampi di adattamento allo stress in tessuti metabolicamente attivi. In quanto nodo che collega le risposte allo stress ossidativo, la dinamica mitocondriale e l’omeostasi proteica, DJ-1 è ampiamente studiata in modelli di vulnerabilità neuronale e resilienza cellulare.

DJ-1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di PARK7 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

DJ-1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus PARK7 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione PARK7, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di DJ-1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus PARK7 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da DJ-1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via DJ-1 nelle cellule tumorali con espressione di PARK7 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.