Dist1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-406805

概要

RHBDF1（Dist1）は、不活性型のロムボイドファミリー分子をコードしており、小胞体（ER）に常在する品質管理および増殖因子シグナル伝達の制御コファクターとして機能します。Dist1は、ADAM17依存的なエクトドメイン・シェディングの制御に関与し、EGFRリガンドの放出と、それに続くMAPK/ERKおよびPI3K/AKT経路の活性、さらに細胞ストレス応答や炎症性シグナル伝達にも影響を与えます。これらの過程を通じて、RHBDF1は上皮の恒常性、細胞生存、移動プログラムに寄与します。RHBDF1の発現や活性の破綻は、がんや炎症の文脈において増殖シグナルの変調や疾患関連表現型と関連づけられており、経路研究における機序解明ターゲットとしての有用性が支持されています。

Dist1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるRHBDF1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、RHBDF1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、RHBDF1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Dist1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Dist1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、RHBDF1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Dist1の機能に不可欠なRHBDF1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、RHBDF1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Dist1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびDist1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、RHBDF1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Dist1 HDRプラスミド（h）および Dist1 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはRHBDF1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のRHBDF1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。