Dist1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-406805

Descripción general

RHBDF1 (Dist1) codifica un miembro inactivo de la familia de las romboidas que actúa como cofactor regulador del control de calidad residente en el RE y de la señalización de factores de crecimiento. Dist1 participa en el control del desprendimiento del ectodominio dependiente de ADAM17, influyendo en la liberación de ligandos de EGFR y en la actividad de las vías MAPK/ERK y PI3K/AKT aguas abajo, así como en las respuestas al estrés celular y la señalización inflamatoria. A través de estos procesos, RHBDF1 contribuye a la homeostasis epitelial, la supervivencia celular y los programas de migración. La expresión o actividad desregulada de RHBDF1 se ha asociado con alteraciones de la señalización proliferativa y con fenotipos relevantes para enfermedad en contextos de cáncer e inflamación, lo que respalda su utilidad como diana mecanística en estudios de vías.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Dist1 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen RHBDF1 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del RHBDF1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de RHBDF1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Dist1.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en RHBDF1 para la investigación de la señalización de Dist1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de RHBDF1 críticos para la función de Dist1
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de RHBDF1 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Dist1 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido Dist1 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus RHBDF1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Dist1 (h) y el plásmido HDR Dist1 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología RHBDF1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana RHBDF1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.