DIO2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-402262

Visão geral

DIO2 codifica a desiodase de iodotironinas tipo II, uma selenoenzima associada ao retículo endoplasmático que catalisa a desiodação no anel externo da tiroxina (T4) para o hormônio ativo triiodotironina (T3). Ao controlar a disponibilidade intracelular de T3, o DIO2 molda programas transcricionais dependentes do receptor de hormônios tireoidianos que regulam o metabolismo energético, a termogênese, a homeostase de lipídios e glicose e a diferenciação em diferentes contextos teciduais. A atividade do DIO2 integra-se à biologia redox e do selênio, incluindo a síntese de selenoproteínas e respostas ao estresse oxidativo que influenciam a estabilidade e a degradação da enzima. Alterações na expressão ou na função de DIO2 têm sido associadas a fenótipos metabólicos e a processos fisiopatológicos responsivos a hormônios tireoidianos, o que sustenta seu estudo na regulação endócrina, em mecanismos relacionados à obesidade e na sinalização tecidual específica de hormônios tireoidianos.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO DIO2 (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene DIO2 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do DIO2, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do DIO2 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína DIO2.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de DIO2 para a investigação da sinalização de DIO2, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) DIO2 críticos para a função DIO2
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos DIO2 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo DIO2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo DIO2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus DIO2. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo DIO2 Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR DIO2 (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia DIO2 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo DIO2 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.