DIO1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-420002

概要

マウスDio1は、ヨードチロニン脱ヨウ素酵素1（DIO1）をコードしている。DIO1はセレンを含む酵素で、甲状腺ホルモンの外環および内環の脱ヨウ素化を触媒し、チロキシン（T4）を生理活性の高いトリヨードチロニン（T3）へ末梢で変換する過程や、ホルモンのクリアランスに寄与する。DIO1活性は、細胞内および循環中の甲状腺ホルモンの利用可能性を調整することで、内分泌・代謝恒常性を支え、甲状腺ホルモン受容体によって制御される転写プログラムに影響を与える。Dio1は、肝臓および腎臓における甲状腺ホルモン代謝、セレン生物学、ならびに酸化還元（レドックス）依存性の酵素機能という文脈で盛んに研究されている。脱ヨウ素酵素の発現や活性の変化は、代謝・炎症状態における甲状腺ホルモンシグナルの破綻と関連づけられており、マウスモデルにおけるDio1依存性経路の機構研究が促進されている。

DIO1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるDio1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Dio1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Dio1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、DIO1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、DIO1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Dio1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• DIO1の機能に不可欠なDio1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Dio1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• DIO1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびDIO1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Dio1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  DIO1 HDRプラスミド（m）および DIO1 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはDio1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のDio1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。