Plásmido CRISPR de Activación (h) DinB: sc-405052-ACT

El gen humano **POLK** codifica la polimerasa de ADN kappa (DinB), una polimerasa de síntesis por translesión de la familia Y que permite la replicación del ADN a través de lesiones voluminosas, como los fotoproductos inducidos por UV y los aductos de benzo[a]pireno. Al promover la tolerancia al daño durante la fase S, **POLK** ayuda a mantener la progresión de la horquilla de replicación e influye en los espectros de mutación cuando el bypass ocurre con menor fidelidad. **POLK** funciona dentro de redes de respuesta al daño del ADN que coordinan el bypass de lesiones, el cambio de polimerasa y la reparación posreplicativa, vinculándolo con la estabilidad del genoma y la adaptación celular al estrés. La actividad desregulada de **POLK** o una expresión alterada se ha asociado con contextos de mutagénesis e inestabilidad genómica relevantes para la biología del cáncer y para modelos de daño del ADN relacionado con la exposición.

DinB El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de POLK sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

DinB El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus POLK en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional POLK, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de DinB. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo POLK y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de DinB en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía DinB en células tumorales con expresión de POLK silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.