Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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DHODH Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-402983
- alvos específicos: human
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- DHODH O Plasmídeo CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) é um conjunto de plasmídeos, cada um codificando a nuclease Cas9 e um RNA guia (gRNA) de 20 nt específico para o alvo, concebido para uma eficiência máxima de knockout utilizando sequências derivadas da biblioteca GeCKO v2
- As sequências de gRNA direcionam a Cas9 para induzir quebras de cadeia dupla (DSBs) específicas do local no locus genómico DHODH, resultando no knockout do gene através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ)
- Os genes de resistência à puromicina e RFP são flanqueados por sítios LoxP, permitindo a remoção de marcadores de seleção através da recombinase Cre (Cre Vector: sc-418923) após o estabelecimento de linhas celulares knockout estáveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:DHODH Anticorpo (E-8): sc-166348
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
DHODH Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-402983 | 20 µg | $397.00 |
Visão geral
A DHODH (di-hidroorotato desidrogenase) humana é uma flavoproteína localizada na membrana interna mitocondrial que catalisa a etapa limitante da velocidade na oxidação de di-hidroorotato a orotato na biossíntese de novo de pirimidinas, acoplando a produção de nucleotídeos à cadeia respiratória por meio da ubiquinona. Ao controlar a disponibilidade de UMP, a DHODH sustenta a síntese de DNA/RNA, a progressão do ciclo celular e a adaptação metabólica durante o estresse proliferativo. A perturbação da atividade da DHODH remodela os pools de nucleotídeos, a dinâmica de replicação e o balanço redox mitocondrial, conectando-a a vias que regulam a manutenção do genoma e a bioenergética celular. Metabolismo de pirimidinas desregulado e dependência de DHODH foram observados em diversos contextos relevantes para doenças, incluindo a proliferação de células cancerosas e a ativação de células imunes.
O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO DHODH (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene DHODH em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do DHODH, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.
O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do DHODH na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína DHODH.
Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de DHODH para a investigação da sinalização de DHODH, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.
Características principais
- sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) DHODH críticos para a função DHODH
Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
Repórter GFP para identificação de células transfectadas
Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos DHODH para melhorar a eficiência do knockout
Compatível com administração por transfecção
Variantes de Design
CRISPRs +/- HDRs
- Os gRNAs codificados pelo DHODH Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo DHODH Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus DHODH. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
As construções doadoras HDR codificadas pelo DHODH Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR DHODH (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia DHODH para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo DHODH definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.