Dectin-1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-417053-ACT

O gene humano **CLEC7A** codifica a **Dectina-1**, um receptor de lectina do tipo C expresso de forma proeminente por células mieloides, que reconhece **β-glucanos** presentes na parede celular de fungos e ligantes endógenos selecionados. Após a ligação ao ligante, a Dectina-1 sinaliza por meio de um motivo semelhante a **ITAM** para ativar as vias **SYK**, **CARD9–BCL10–MALT1**, **NF-κB** e **MAPK**, coordenando a fagocitose, a explosão respiratória, a produção de citocinas e respostas associadas ao inflamassoma. Esse receptor também modula a comunicação cruzada com receptores do tipo Toll e influencia a apresentação de antígenos e a comunicação inata-adaptativa com viés para **Th17**. Alterações na atividade de **CLEC7A/Dectina-1** têm sido associadas à suscetibilidade a infecções fúngicas, à desregulação de sinais inflamatórios e a fenótipos do microambiente tumoral–mieloide relevantes para a imunologia e a pesquisa em interação hospedeiro–patógeno.

Dectin-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CLEC7A sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Dectin-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CLEC7A em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CLEC7A, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Dectin-1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CLEC7A nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Dectin-1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Dectin-1 em células tumorais com expressão de CLEC7A silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.