Decorin CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400786-ACT

DCNはデコリンをコードする遺伝子であり、デコリンは分泌性の小型ロイシンリッチ・プロテオグリカンとして、線維性コラーゲンに結合し、細胞外マトリックス（ECM）の組み立て、組織の生体力学的特性、ならびに細胞—マトリックス接着を調節します。デコリンは、TGF-β/SMADをはじめ、EGFRなどの受容体型チロシンキナーゼ経路を含む主要なシグナル伝達軸を制御し、線維芽細胞の活性化、筋線維芽細胞への分化、炎症を伴うリモデリングに影響を与えます。コラーゲン線維形成や増殖因子の隔離に関与することから、DCNは線維化、腫瘍微小環境の生物学、創傷修復、結合組織の恒常性の研究で頻繁に注目されています。デコリン発現の異常やECM構造の変化は、複数の臓器系にわたる病的リモデリングと関連づけられており、メカノバイオロジー研究におけるECMシグナルの結節点としての有用性を支持しています。

Decorin CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性DCNの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Decorin CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における DCN 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はDCN転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Decorinの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のDCN遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるDecorin依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびDCN発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるDecorin経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。