DEC1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402058-ACT

BHLHE40 codifica o fator de transcrição básico hélice-alça-hélice DEC1, um regulador dependente do contexto da expressão gênica que integra estímulos ambientais como hipóxia e sinais circadianos. O DEC1 modula programas transcricionais ligados ao controle do ciclo celular, à diferenciação, à transição epitélio-mesenquimal e à adaptação metabólica, e interage com vias que incluem a sinalização de HIF-1 e as redes centrais do relógio circadiano. Por meio dessas funções, o DEC1 contribui para a regulação de respostas ao estresse e da expressão de genes inflamatórios, com associações descritas com a biologia tumoral, o remodelamento relacionado à fibrose e a desregulação imune em diversos sistemas experimentais.

DEC1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de BHLHE40 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

DEC1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus BHLHE40 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição BHLHE40, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de DEC1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus BHLHE40 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de DEC1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via DEC1 em células tumorais com expressão de BHLHE40 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.