DDX46 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-407298

Visão geral

DDX46 codifica uma helicase de RNA dependente de ATP que atua como um componente central do snRNP U5 no spliceossoma, sustentando o splicing do pré‑mRNA e a fidelidade na seleção dos sítios de splicing. Ao remodelar complexos RNA–proteína durante a montagem do spliceossoma e a ativação catalítica, DDX46 influencia a maturação de transcritos, programas de splicing alternativo e a composição do proteoma a jusante. A perturbação da atividade de helicases do spliceossoma pode alterar redes de processamento de RNA que regulam a progressão do ciclo celular, respostas a danos no DNA e saídas transcricionais adaptativas ao estresse. A maquinaria de splicing desregulada, incluindo fatores associados ao U5, é amplamente implicada na reprogramação oncogênica do transcriptoma e em mecanismos de doenças do neurodesenvolvimento e neurodegenerativas, tornando DDX46 um nó útil para estudos de biologia do RNA.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO DDX46 (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene DDX46 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do DDX46, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do DDX46 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína DDX46.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de DDX46 para a investigação da sinalização de DDX46, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) DDX46 críticos para a função DDX46
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos DDX46 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo DDX46 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo DDX46 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus DDX46. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo DDX46 Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR DDX46 (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia DDX46 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo DDX46 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.