DDX15 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403959-ACT

DHX15 (DDX15) codifica uma helicase de RNA dependente de ATP da família DEAH-box que remodela complexos RNA–proteína para dar suporte ao splicing do pré‑mRNA e a aspectos mais amplos do metabolismo de RNA. Ela participa da dinâmica do spliceossomo, incluindo o reconhecimento de íntrons e transições catalíticas, e tem sido associada à coordenação entre transcrição e processamento de RNA. Ao influenciar o uso de isoformas de transcritos e o controle de qualidade de RNA, a DDX15 pode modular programas de expressão gênica que moldam a progressão do ciclo celular e respostas ao estresse. Alterações na regulação do splicing e na atividade de helicases são frequentemente associadas à transformação oncogênica e a fenótipos hematológicos e do neurodesenvolvimento, tornando a DHX15 um ponto de interesse para estudos mecanísticos de defeitos no processamento de RNA.

DDX15 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de DHX15 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

DDX15 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus DHX15 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição DHX15, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de DDX15. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus DHX15 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de DDX15 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via DDX15 em células tumorais com expressão de DHX15 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.