DDB1 Lentiviral Activation Particles (m): sc-419966-LAC

Maus-DDB1 (damage specific DNA binding protein 1) ist eine Kernkomponente des CUL4–DDB1-E3-Ubiquitin-Ligase-Komplexes, der die Substrat-Ubiquitinierung koordiniert, um den Proteinumsatz über den gesamten Zellzyklus hinweg zu regulieren. DDB1 ist an der Nukleotid-Exzisionsreparatur sowie an replikationsassoziierten DNA-Schadensantworten beteiligt und verknüpft chromatinassoziierte Läsionen mit ubiquitinabhängiger Signalgebung und Proteostase. Über Interaktionen mit DCAF-Substratrezeptoren trägt DDB1 zur Steuerung von Chromatin-Remodeling, Replikationslizenzierung und Checkpoint-Kontrolle bei. Fehlregulierte, DDB1-abhängige Ubiquitinierung und Signalwege der Genomstabilität sind in Mausmodellen relevant für Studien zu onkogenem Stress, Entwicklungsphänotypen und DNA-Reparaturdefekten, die mit Neurodegeneration assoziiert sind.

DDB1 Lentivirale Aktivierungspartikel (m) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente Ddb1-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

DDB1 Lentivirale Aktivierungspartikel (m) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der Ddb1-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen DDB1-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen Ddb1-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.