DD4 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403692-ACT

ヒトのAKR1C4はDD4をコードしており、DD4はNADPH依存性のアルド-ケト還元酵素として、ステロイドホルモンおよび反応性カルボニル基質の還元を触媒します。DD4は肝臓におけるステロイドおよび胆汁酸代謝で重要な役割を担い、ケトステロイドの相互変換の制御を通じて解毒作用や酸化還元恒常性の維持に寄与します。アンドロゲン、プロゲスチン、その他のステロイド中間体の量を調節することで、AKR1C4はホルモン依存的な転写プログラムや代謝シグナル伝達ネットワークに影響を及ぼします。AKR1C4の発現量または活性の変化は、ステロイド代謝の破綻や肝臓の病態生理と関連づけられており、代謝疾患の生物学や異物応答を研究する上での重要性が示唆されています。

DD4 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性AKR1C4の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

DD4 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における AKR1C4 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はAKR1C4転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性DD4の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のAKR1C4遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるDD4依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびAKR1C4発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるDD4経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。