Dcun1D4 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-409238

Descripción general

DCUN1D4 codifica Dcun1D4, un miembro de la familia DCN1-like implicado en la regulación de la actividad de las ligasas E3 de ubiquitina tipo cullina-RING mediante el control de la neddilación de cullinas. Al modular la activación dependiente de NEDD8 de los complejos de cullina, Dcun1D4 puede influir en la proteostasis mediada por ubiquitina, la progresión del ciclo celular y vías de señalización que dependen de un recambio oportuno de sustratos. La actividad alterada dentro del eje neddilación–ubiquitina es ampliamente relevante para la estabilidad del genoma y los programas de respuesta al estrés, lo que convierte a DCUN1D4 en un locus útil para investigar la especificidad de las vías a través de procesos dependientes de CRL. La desregulación de la maquinaria de ubiquitina y neddilación se observa en múltiples contextos de enfermedad, lo que respalda estudios mecanísticos de DCUN1D4 en la homeostasis celular y la perturbación de vías.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Dcun1D4 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen DCUN1D4 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del DCUN1D4 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de DCUN1D4 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Dcun1D4.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en DCUN1D4 para la investigación de la señalización de Dcun1D4, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de DCUN1D4 críticos para la función de Dcun1D4
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de DCUN1D4 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Dcun1D4 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido Dcun1D4 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus DCUN1D4. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Dcun1D4 (h) y el plásmido HDR Dcun1D4 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología DCUN1D4 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana DCUN1D4 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.