Não são dados CRISPR: a imagem ilustra a qualidade do anticorpo para visualizar os resultados da experiência CRISPR.
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DBH Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-402441
- alvos específicos: human
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- DBH O Plasmídeo CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) é um conjunto de plasmídeos, cada um codificando a nuclease Cas9 e um RNA guia (gRNA) de 20 nt específico para o alvo, concebido para uma eficiência máxima de knockout utilizando sequências derivadas da biblioteca GeCKO v2
- As sequências de gRNA direcionam a Cas9 para induzir quebras de cadeia dupla (DSBs) específicas do local no locus genómico DBH, resultando no knockout do gene através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ)
- Os genes de resistência à puromicina e RFP são flanqueados por sítios LoxP, permitindo a remoção de marcadores de seleção através da recombinase Cre (Cre Vector: sc-418923) após o estabelecimento de linhas celulares knockout estáveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:DBH Anticorpo (A-9): sc-365710
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
DBH Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-402441 | 20 µg | $397.00 |
Visão geral
A dopamina beta-hidroxilase (DBH) codifica uma mono-oxigenase dependente de cobre que catalisa a conversão de dopamina em noradrenalina no interior de vesículas secretoras de neurónios simpáticos e de células cromafins da medula adrenal. Ao controlar a biossíntese de catecolaminas, a DBH influencia a sinalização adrenérgica, as respostas neuroendócrinas ao stress e vias a jusante mediadas por GPCR que regulam o tónus cardiovascular e o estado de alerta do sistema nervoso central. Variações na expressão da DBH ou na atividade enzimática têm sido associadas a alterações na homeostase da noradrenalina e estudadas no contexto de fenótipos neuropsiquiátricos e disfunção autonómica. Assim, a DBH é um alvo útil para dissecar o fluxo da via das catecolaminas, o acoplamento estímulo–secreção e o equilíbrio de neurotransmissores em modelos celulares humanos.
O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO DBH (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene DBH em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do DBH, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.
O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do DBH na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína DBH.
Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de DBH para a investigação da sinalização de DBH, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.
Características principais
- sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) DBH críticos para a função DBH
Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
Repórter GFP para identificação de células transfectadas
Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos DBH para melhorar a eficiência do knockout
Compatível com administração por transfecção
Variantes de Design
CRISPRs +/- HDRs
- Os gRNAs codificados pelo DBH Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo DBH Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus DBH. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
As construções doadoras HDR codificadas pelo DBH Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR DBH (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia DBH para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo DBH definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.