DAP12 Double Nickaseプラスミド (m): sc-423568-NIC

Tyrobp は DAP12（TYROBP）をコードしており、DAP12 は免疫受容体チロシン系活性化モチーフ（ITAM）を有する膜貫通型アダプターとして、骨髄系細胞における複数の活性化受容体を細胞内シグナル伝達へと連結します。マウスのミクログリア、マクロファージ、樹状細胞、破骨細胞系譜細胞では、DAP12 は TREM2、SIRPβ1、その他の Ig 様受容体などと会合し、SYK 依存性カスケードを促進することで、貪食、サイトカイン産生、走化性、生存、ならびに細胞骨格リモデリングを制御します。このシグナル軸は、FcR 介在応答や PI3K–AKT および MAPK シグナル伝達などの自然免疫経路とも交差し、炎症のトーンや組織監視のあり方を形成します。TYROBP/DAP12 ネットワーク活性の変化は、神経炎症やミクログリア状態の移行、宿主防御、骨リモデリング異常などの文脈で広く研究されています。

DAP12 ダブルニカースプラスミド（m）は、mouse 細胞株における Tyrobp 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、Tyrobp内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、Tyrobpの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、Tyrobpが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。