Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
DAAO Double Nickaseプラスミド (h): sc-402772-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- DAAO Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- DAAOダブルニカースプラスミド（h）およびDAAOダブルニカースプラスミド（h2）は、DAOを標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: DAAO 抗体 (B-3): sc-398757
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
DAAO Double Nickaseプラスミド (h) | sc-402772-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
DAAO Double Nickaseプラスミド (h2) | sc-402772-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ヒトのDAOはD-アミノ酸オキシダーゼ（DAAO）をコードしており、DAAOはペルオキシソームに局在するフラビンタンパク質で、中性D-アミノ酸を対応するケト酸へ酸化的脱アミノ化すると同時に過酸化水素を産生します。この活性は、アミノ酸分解代謝、細胞のレドックス恒常性、ならびにペルオキシソーム関連の活性酸素種（ROS）代謝と結びついており、とりわけ中枢神経系におけるD-セリンの利用可能性の調節や、NMDA受容体に対する共アゴニスト作用との関連で重要です。DAO/DAAO機能の変化は、神経精神疾患および神経変性疾患の生物学的背景の文脈で研究されており、D-セリンの代謝回転や酸化ストレス経路の変動がシナプスシグナル伝達に影響し得ます。DAOはまた、ペルオキシソーム酵素の輸送、フラビン依存性の酸化反応化学、ならびに過酸化物に対する細胞応答を研究するための代謝上の結節点としても用いられます。
DAAO ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における DAO 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、DAO内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、DAOの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、DAOが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。