Cytoplasmic CysRS CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-406444

概要

CARS は細胞質型システイニル tRNA 合成酵素（CysRS）をコードしており、これはクラス I のアミノアシル tRNA 合成酵素として、細胞質でシステインを対応する tRNA に結合させ、翻訳の正確性を担保します。荷電化された tRNA\(^\text{Cys}\) の供給を制御することで、細胞質 CysRS は全体的なタンパク質合成を支えるとともに、翻訳を調節するストレス応答を含むプロテオスタシス経路にアミノ酸の利用可能性を結び付けます。アミノアシル tRNA 合成酵素活性が乱れると、リボソーム動態が変化し、統合的ストレスシグナルが誘導され得ます。その結果、細胞増殖、代謝、ならびにシステイン利用に依存するレドックス感受性プロセスに下流影響が及びます。tRNA の荷電化と翻訳品質管理の破綻は、神経発生・神経筋表現型、増殖性疾患、そして細胞のストレス適応に関する研究において重要な観点です。

Cytoplasmic CysRS CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるCARS遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、CARS内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、CARSのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Cytoplasmic CysRSタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Cytoplasmic CysRSシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、CARS欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Cytoplasmic CysRSの機能に不可欠なCARSエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、CARSゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Cytoplasmic CysRS CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびCytoplasmic CysRS CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、CARS遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Cytoplasmic CysRS HDRプラスミド（h）および Cytoplasmic CysRS HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはCARSホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のCARS標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。