CYP7A1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401001-ACT

ヒトCYP7A1はコレステロール7α-ヒドロキシラーゼをコードしており、肝臓で高発現するシトクロムP450酵素として、コレステロールから古典的胆汁酸合成経路へ至る最初の反応であり律速段階を触媒します。コレステロールを一次胆汁酸へ変換する過程を制御することで、CYP7A1はコレステロール恒常性、腸肝循環シグナル、さらにFXRなどの核内受容体を介したフィードバック調節や下流の代謝関連遺伝子プログラムに影響を及ぼします。CYP7A1活性の変化は、胆汁酸プールの異常、 高コレステロール血症への感受性、脂質吸収や肝臓での脂質処理に影響する代謝表現型と関連づけられてきました。ステロールおよび胆汁酸代謝の中心的ノードとして、CYP7A1は肝細胞生物学、代謝制御、ならびに炎症応答や異物応答との経路間クロストークの観点から広く研究されています。

CYP7A1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性CYP7A1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

CYP7A1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における CYP7A1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はCYP7A1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性CYP7A1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のCYP7A1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるCYP7A1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびCYP7A1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるCYP7A1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。