CYP4X1 Plasmide di attivazione CRISPR (h2): sc-415272-ACT-2

Il gene umano CYP4X1 codifica una monoossigenasi del citocromo P450 della famiglia CYP4 che catalizza il metabolismo ossidativo di lipidi endogeni, contribuendo all’idrossilazione degli acidi grassi e ai correlati processi di segnalazione derivati dagli eicosanoidi. L’attività di CYP4X1 è associata all’omeostasi dei lipidi di membrana e alla regolazione delle risposte cellulari dipendente dallo stato redox, collocandolo in vie che coordinano il turnover dei mediatori lipidici e la specializzazione metabolica specifica dei tessuti. Un’espressione deregolata o un’ossidazione lipidica alterata associata a CYP4X1 sono state studiate in ambito neurobiologico e oncologico, dove variazioni nei metaboliti correlati all’acido arachidonico possono influenzare la segnalazione legata all’infiammazione e i programmi di proliferazione cellulare. L’editing genetico di CYP4X1 supporta studi meccanicistici sul metabolismo lipidico guidato dai P450, la mappatura dei substrati e la metabolomica, nonché la validazione degli effetti di via in modelli cellulari ingegnerizzati pertinenti alla biologia delle malattie umane.

CYP4X1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h2) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di CYP4X1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

CYP4X1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h2) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus CYP4X1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione CYP4X1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di CYP4X1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus CYP4X1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da CYP4X1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via CYP4X1 nelle cellule tumorali con espressione di CYP4X1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.