CYP4X1CRISPR激活质粒(h2): sc-415272-ACT-2
- 针对种属：human
- 20 µg 纯化的即用型的质粒DNA，最多可供20次转染
- CYP4X1 CRISPER激活质粒（h2）是一种协同激活介质（SAM）转录激活系统，目的在于特定上调基因表达
- CYP4X1 CRISPR 激活质粒 (h2)包含三种质量比为1:1:1的质粒：一种质粒编码与转录激活结构域VP64融合的去活化的Cas9 (dCas9)核酸酶(D10A and N863A)，和杀稻瘟素抗性基因；一种质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白，和潮霉素抗性基因；一种质粒编码与两个MS2 RNA适体融合的目标特异的20 nt向导RNA，和嘌呤霉素抗性基因。
- 形成的SAM复合物结合到转录起始位点上游大约200-250 nt的特定位点区域，为高效激活基因提供转录因子的招募
- 由 CYP4X1 CRISPR 激活质粒 (h2) 和 CYP4X1 CRISPR 激活质粒 (h22) 编码的 gRNA 分别针对 CYP4X1 转录起始位点上游的不同调控区域。其中一种或两种设计可能可用
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CYP4X1CRISPR激活质粒(h2) | sc-415272-ACT-2 | 20 µg | $397.00 |
人类CYP4X1基因编码一种隶属于CYP4家族的细胞色素P450单加氧酶，能够催化内源性脂质的氧化代谢，参与脂肪酸羟化以及与此相关的类二十烷酸衍生信号过程；CYP4X1的活性与膜脂稳态和依赖氧化还原状态的细胞反应调控有关，使其处于协调脂质介质周转与组织特异性代谢分工的通路之中；在神经生物学与肿瘤学研究背景下，CYP4X1表达失衡或其相关的脂质氧化改变已受到关注，因为花生四烯酸相关代谢物的变化可影响炎症相关信号及细胞增殖程序；对CYP4X1进行基因编辑有助于开展以P450驱动的脂质代谢机制研究、底物谱绘制与代谢组学分析，并在与人类疾病生物学相关的工程化细胞模型中验证通路效应。
CYP4X1 CRISPR激活质粒（h2）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性CYP4X1的表达。
CYP4X1 CRISPR激活质粒（h2）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的CYP4X1基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。
在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于CYP4X1转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性CYP4X1表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的CYP4X1位点，并能够研究内源性位点上依赖于CYP4X1的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在CYP4X1表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟CYP4X1通路恢复的宝贵工具。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。