CYP2J2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-402955

概要

CYP2J2は、ミクロソーム局在性のシトクロムP450モノオキシゲナーゼをコードしており、内因性脂質や外来性化合物（ゼノバイオティクス）のNADPH依存的な酸化反応を触媒します。特にアラキドン酸に対するエポキシゲナーゼ活性が顕著で、エポキシエイコサトリエン酸（EETs）を産生します。これらの代謝産物は、血管緊張の調節、炎症シグナル伝達、細胞増殖、酸化ストレス応答の制御に寄与し、CYP2J2活性をエイコサノイドや脂質メディエーター経路と結び付けています。CYP2J2は心血管系を含む肝外組織にも発現しており、内皮機能や代謝恒常性における役割が示唆されています。また、その発現や活性の変化は、心代謝性および炎症性の表現型と関連づけられています。がん生物学の分野では、CYP2J2依存的な脂質シグナルが腫瘍細胞の生存、遊走、ならびに腫瘍微小環境とのクロストークとの関連で検討されており、機序解析研究の有用な標的となっています。

CYP2J2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるCYP2J2遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、CYP2J2内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、CYP2J2のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、CYP2J2タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、CYP2J2シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、CYP2J2欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• CYP2J2の機能に不可欠なCYP2J2エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、CYP2J2ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• CYP2J2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびCYP2J2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、CYP2J2遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  CYP2J2 HDRプラスミド（h）および CYP2J2 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはCYP2J2ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のCYP2J2標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。