CYP2J2 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402955-ACT

CYP2J2は、アラキドン酸をエポキシエイコサトリエン酸（EETs）へと代謝するヒトのシトクロムP450エポキシゲナーゼをコードします。EETは生理活性脂質メディエーターであり、血管緊張、炎症、酸化ストレス応答、ならびに細胞生存シグナル伝達に影響を及ぼします。脂質シグナル伝達と異物代謝における役割を通じて、CYP2J2は内皮および心臓の生理機能に寄与し、一酸化窒素（NO）シグナル、炎症性サイトカインのネットワーク、レドックス恒常性に関連する経路を調節し得ます。CYP2J2の発現や活性の変化は、心血管系および代謝表現型に加え、EET介在性シグナルが増殖や遊走に影響し得る腫瘍生物学の文脈でも研究されています。これらの特性により、CYP2J2は脂質メディエーター生物学の機構解明や、P450依存的な細胞状態遷移の制御を研究するうえで有用な標的となります。

CYP2J2 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性CYP2J2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

CYP2J2 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における CYP2J2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はCYP2J2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性CYP2J2の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のCYP2J2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるCYP2J2依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびCYP2J2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるCYP2J2経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。