Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
CYP2D6 Plasmide Double Nickase (h): sc-404098-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- CYP2D6 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il CYP2D6 Double Nickase Plasmid (h) e il CYP2D6 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira CYP2D6. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: CYP2D6 Antibody (2K6): sc-130366
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
CYP2D6 Plasmide Double Nickase (h) | sc-404098-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
CYP2D6 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-404098-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CYP2D6 codifica una monoossigenasi microsomiale del citocromo P450 che catalizza la biotrasformazione ossidativa di un’ampia gamma di substrati endogeni e xenobiotici. Espressa prevalentemente negli epatociti e localizzata nel reticolo endoplasmatico, CYP2D6 opera in un trasferimento di elettroni dipendente dalla NADPH–citocromo P450 reduttasi, sostenendo il metabolismo di Fase I all’interno delle reti di processamento di farmaci e steroidi. La variazione genetica o una regolazione alterata di CYP2D6 può modificare la capacità metabolica, influenzando l’esposizione cellulare a intermedi bioattivi e le risposte allo stress ossidativo. Per questo motivo, CYP2D6 è ampiamente studiato in farmacogenomica, tossicologia e modelli di metabolismo epatico per comprendere le differenze interindividuali nei fenotipi metabolici.
CYP2D6 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus CYP2D6 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di CYP2D6. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di CYP2D6. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con CYP2D6 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.