CYP27A1 Double Nickaseプラスミド (h): sc-402836-NIC

ヒトCYP27A1は、胆汁酸生合成の過程でコレステロールおよびステロール中間体の酸化を触媒する、ミトコンドリア局在のシトクロムP450酵素であるステロール27-ヒドロキシラーゼをコードしている。CYP27A1は27-ヒドロキシ化ステロールを産生することで、ミトコンドリアでのステロール分解を支え、脂質恒常性に寄与するとともに、肝臓における胆汁酸代謝、コレステロール輸送、オキシステロールシグナル伝達経路と連関する。CYP27A1活性の変化はステロールおよび胆汁酸組成に影響し、脳腱黄色腫症（cerebrotendinous xanthomatosis）などの胆汁酸代謝の先天異常と関連づけられており、その下流でコレステロール沈着や組織におけるステロール取り扱いに影響を及ぼす。したがってCYP27A1は、代謝生物学、ミトコンドリアP450の機能、ならびにオキシステロールを介した核内受容体ネットワークの制御に関する研究で広く解析されている。

CYP27A1 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における CYP27A1 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、CYP27A1内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、CYP27A1の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、CYP27A1が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。