CYP27A1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402836-ACT

CYP27A1 は、コレステロールからの胆汁酸生合成における酸化反応段階を触媒し、さらにステロールおよびオキシステロール代謝にも関与する、ミトコンドリア局在のシトクロム P450 酵素であるステロール 27-ヒドロキシラーゼをコードします。27-ヒドロキシコレステロールなどの中間体を産生することで、CYP27A1 はコレステロール恒常性、脂質輸送、ならびにミトコンドリア機能や代謝制御に関連するシグナル伝達経路に影響を及ぼします。CYP27A1 活性の攪乱は、胆汁酸組成の変化やステロールの蓄積と関連し、遺伝性脂質蓄積疾患である脳腱黄色腫症（cerebrotendinous xanthomatosis：CTX）への関与が示唆されています。これらの機能により、CYP27A1 はヒト細胞におけるミトコンドリアでのステロイド酸化、代謝リワイヤリング、ならびにステロール駆動性の転写応答を研究するうえで有用な標的となります。

CYP27A1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性CYP27A1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

CYP27A1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における CYP27A1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はCYP27A1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性CYP27A1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のCYP27A1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるCYP27A1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびCYP27A1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるCYP27A1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。