cyclin T2a/b Plasmide Double Nickase (h): sc-404586-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- cyclin T2a/b Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il cyclin T2a/b Double Nickase Plasmid (h) e il cyclin T2a/b Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira CCNT2. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: cyclin T2a/b Antibody (2128C1a): sc-81243
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
cyclin T2a/b Plasmide Double Nickase (h) | sc-404586-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
cyclin T2a/b Plasmide Double Nickase (h2) | sc-404586-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CCNT2 codifica la ciclina T2 (isoforme T2a e T2b), una ciclina regolatoria che si associa a CDK9 per formare il complesso del fattore positivo di elongazione della trascrizione b (P-TEFb). P-TEFb fosforila il dominio C-terminale dell’RNA polimerasi II e i fattori negativi dell’elongazione, promuovendo un’elongazione trascrizionale produttiva e coordinando programmi di espressione legati alla progressione del ciclo cellulare, alla differenziazione e alle risposte allo stress. Attraverso interazioni con regolatori trascrizionali e reti di controllo dell’elongazione, la ciclina T2 influenza le dinamiche della trascrizione associata alla cromatina su diversi insiemi genici. La deregolazione della segnalazione di P-TEFb e del controllo dell’elongazione è stata associata ad alterazioni degli stati trascrizionali proliferativi e immunitari, rendendo CCNT2 un bersaglio utile per studi meccanicistici di fenotipi dipendenti dalla trascrizione.
cyclin T2a/b Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus CCNT2 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di CCNT2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di CCNT2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con CCNT2 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.