cyclin T2a/b Double Nickaseプラスミド (h): sc-404586-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- cyclin T2a/b Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- cyclin T2a/bダブルニカースプラスミド（h）およびcyclin T2a/bダブルニカースプラスミド（h2）は、CCNT2を標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: cyclin T2a/b 抗体 (2128C1a): sc-81243
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
cyclin T2a/b Double Nickaseプラスミド (h) | sc-404586-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
cyclin T2a/b Double Nickaseプラスミド (h2) | sc-404586-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CCNT2は、CDK9と協調して正の転写伸長因子b（P-TEFb）複合体を形成する調節性サイクリンであるサイクリンT2（アイソフォームT2aおよびT2b）をコードします。P-TEFbはRNAポリメラーゼIIのC末端ドメイン（CTD）および負の伸長因子をリン酸化し、実効的な転写伸長を促進するとともに、細胞周期進行、分化、ストレス応答に関連する発現プログラムを協調的に制御します。転写調節因子や伸長制御ネットワークとの相互作用を介して、サイクリンT2は多様な遺伝子群にわたるクロマチン関連の転写ダイナミクスに影響を及ぼします。P-TEFbシグナル伝達および伸長制御の破綻は、増殖や免疫に関わる転写状態の変化と関連付けられており、そのためCCNT2は転写依存的な表現型の機序解析に有用な標的となります。
cyclin T2a/b ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における CCNT2 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、CCNT2内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、CCNT2の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、CCNT2が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。