CUL-3 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-416925

Visão geral

CUL3 codifica a cullina-3 (CUL-3), um arcabouço central dos complexos de ligase E3 de ubiquitina CUL3–RBX1, que recrutam proteínas adaptadoras com domínio BTB para conferir especificidade de substrato à ubiquitinação e à degradação pelo proteassoma. Por meio da degradação regulada de alvos envolvidos na homeostase redox, no controle do ciclo celular, na dinâmica do citoesqueleto e na sinalização de estresse, a CUL-3 ajuda a coordenar vias como a função do sistema ubiquitina–proteassoma e as respostas ao estresse oxidativo mediadas por NRF2/KEAP1. A perturbação da ubiquitinação dependente de CUL3 pode desorganizar a proteostase e redes de sinalização que moldam a inflamação, o metabolismo e a integridade do genoma. Atividade desregulada de CUL3 e interações alteradas com adaptadores têm sido associadas na literatura a vias relacionadas ao câncer e a mecanismos de doenças cardiovasculares e do neurodesenvolvimento, sustentando sua utilidade como um nó para dissecação de vias.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO CUL-3 (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene CUL3 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do CUL3, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do CUL3 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína CUL-3.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de CUL3 para a investigação da sinalização de CUL-3, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) CUL3 críticos para a função CUL-3
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos CUL3 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo CUL-3 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo CUL-3 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus CUL3. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo CUL-3 Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR CUL-3 (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia CUL3 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo CUL3 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.