CTMP CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-429205

概要

Them4 は、AKT/PKB シグナル伝達の調節因子としてよく知られる膜結合性タンパク質 CTMP（carboxyl-terminal modulator protein）をコードします。CTMP は AKT に結合してそのリン酸化状態に影響を与えることができ、Them4 を PI3K–AKT 経路による細胞生存、代謝、ストレス応答の制御と結び付けます。マウス系では、CTMP 活性の変化がミトコンドリア機能、酸化ストレス応答、アポトーシス関連プロセスの変動と関連することが示されています。PI3K–AKT シグナルは炎症性、代謝性、神経変性の表現型に広く関与するため、Them4 はシグナル動態を疾患関連の細胞状態へとつなぐ結節点として、しばしば研究対象となっています。

CTMP CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるThem4遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Them4内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Them4のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、CTMPタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、CTMPシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Them4欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• CTMPの機能に不可欠なThem4エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Them4ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• CTMP CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびCTMP CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Them4遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  CTMP HDRプラスミド（m）および CTMP HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはThem4ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のThem4標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。