CstF-64 Double Nickaseプラスミド (h): sc-402202-NIC

CSTF2は、切断刺激因子（cleavage stimulation factor：CstF）の64 kDaサブユニット（CstF-64）をコードしており、3′末端pre-mRNAプロセシング機構に必須のRNA結合性構成要素である。CstF-64はGUリッチな下流配列エレメントを認識し、CPSFなど他の因子と協調してエンドヌクレアーゼによる切断とポリアデニル化を促進することで、転写産物の安定性、翻訳、遺伝子発現プログラムを形成する。代替ポリアデニル化部位の選択に影響を与えることにより、CSTF2は3′UTR長と転写後制御の調節に寄与し、増殖状況やストレス応答状況において重要な役割を果たす。3′末端プロセシングおよび代替ポリアデニル化の破綻は、がん原性の遺伝子発現シグネチャやその他の疾患関連トランスクリプトーム変化としばしば関連しており、CSTF2はRNA成熟の機構研究における有用な標的となる。

CstF-64 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における CSTF2 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、CSTF2内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、CSTF2の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、CSTF2が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。