CRSP130 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-406593

Visão geral

MED23 codifica a CRSP130, uma subunidade central do complexo Mediator que conecta fatores de transcrição específicos de sequência à RNA polimerase II, coordenando o início da transcrição e programas de expressão gênica dependentes de sinal. A CRSP130 ajuda a integrar entradas regulatórias de vias de desenvolvimento e de resposta ao estresse para modular a atividade de promotores e o controle transcricional associado à cromatina. Por meio da regulação, dependente do Mediator, de amplas redes gênicas, a MED23 tem sido associada na literatura a estados alterados de crescimento e diferenciação celular e a saídas transcricionais desreguladas observadas em múltiplos contextos de doença. Seu papel central nos circuitos transcricionais torna a MED23 um alvo útil para dissecar a comunicação via‑promotor e a dependência de fatores de transcrição em modelos de células humanas.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO CRSP130 (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene MED23 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do MED23, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do MED23 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína CRSP130.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de MED23 para a investigação da sinalização de CRSP130, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) MED23 críticos para a função CRSP130
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos MED23 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo CRSP130 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo CRSP130 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus MED23. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo CRSP130 Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR CRSP130 (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia MED23 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo MED23 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.