CRABP-I Plasmide Double Nickase (h2): sc-405485-NIC-2
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- CRABP-I Plasmide Double Nickase (h2) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il CRABP-I Double Nickase Plasmid (h2) e il CRABP-I Double Nickase Plasmid (h22) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira CRABP1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
CRABP-I Plasmide Double Nickase (h2) | sc-405485-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Il gene umano CRABP1 codifica la cellular retinoic acid–binding protein 1 (CRABP-I), un trasportatore citosolico ad alta affinità che sequestra e veicola l’acido retinoico tutto-trans, modulandone la disponibilità intracellulare e la segnalazione spazio-temporale. Regolando la distribuzione dei retinoidi, CRABP-I influenza i programmi trascrizionali dipendenti dall’acido retinoico mediati dai recettori nucleari (RAR/RXR) e incide su processi quali differenziazione, proliferazione e patterning dello sviluppo. Alterazioni dell’omeostasi dei retinoidi e dell’espressione di CRABP1 sono state associate a una segnalazione deregolata nel cancro e in altri disturbi legati al metabolismo della vitamina A e agli stati di differenziazione cellulare. Studi di gene editing e di perturbazione di CRABP1 consentono di analizzare i meccanismi delle reti di segnalazione dei retinoidi, la dinamica di buffering del ligando e gli esiti trascrizionali in modelli cellulari umani pertinenti.
CRABP-I Il plasmide Double Nickase (h2) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus CRABP1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di CRABP1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di CRABP1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con CRABP1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.