CRABP-I Double Nickaseプラスミド (h2): sc-405485-NIC-2
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- CRABP-I Double Nickaseプラスミド (h2)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- CRABP-Iダブルニカースプラスミド（h2）およびCRABP-Iダブルニカースプラスミド（h22）は、CRABP1を標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
CRABP-I Double Nickaseプラスミド (h2) | sc-405485-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ヒトCRABP1は細胞性レチノイン酸結合タンパク質1（CRABP-I）をコードしており、これは全トランス型レチノイン酸（all-trans retinoic acid）を高親和性で結合して隔離し、細胞質内で輸送する担体として機能することで、その細胞内での利用可能性や時空間的なシグナル伝達のあり方を規定する。CRABP-Iはレチノイドの細胞内分布を調節することにより、核内受容体（RAR/RXR）を介したレチノイン酸依存的な転写プログラムに影響を与え、分化、増殖、発生過程におけるパターニングなどのプロセスを左右する。レチノイド恒常性やCRABP1発現の変化は、がんをはじめ、ビタミンA代謝や細胞分化状態に関連する他の疾患におけるシグナル伝達の破綻と関連づけられている。さらに、CRABP1の遺伝子編集や機能摂動の研究は、適切なヒト細胞モデルにおいて、レチノイドシグナル伝達ネットワークの機構解明、リガンドのバッファリング動態、ならびに転写応答の帰結を検証するための手段となる。
CRABP-I ダブルニカースプラスミド（h2）は、human 細胞株における CRABP1 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、CRABP1内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、CRABP1の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、CRABP1が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。